醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)/基因異常與診斷方法的選用
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各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。后者包括單個堿基置換、微小缺失或插入。近年來不發(fā)現(xiàn)一些遺傳病是由于基因內(nèi)的三核苷酸重復(fù)順序增加引起的，根據(jù)對基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法（表13-2）。如基因缺失可用基因探針雜交，PCR擴增直接檢測；點突變可用等位基因特異的ASO探針、SSCP等直接檢查。一般無需對家系成員進行分析。但條件是必需知道基因異常的性質(zhì)，并肯定該異常與疾病之間的關(guān)系。然而，由于許多疾病的遺傳異質(zhì)性，以及多數(shù)遺傳的基因異常尚屬未知，目前能直接診斷的病種雖日益增多，但仍然是比較有限的。
表13-2 遺傳的基因診斷方法
| 基因異常 | 方法 | 探針、引物或限制酶 |
| 基因缺失 | 基因組DNA印跡雜交 PCR擴增 |
缺失基因的探針 引物包括缺失或在缺失部位內(nèi) |
| 點突變 | RFLP分析 ASO雜交 PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析 （RFLP、SSCP、DGGE） |
突變導(dǎo)致其切點消失的限制酶 正常和異常的ASO探針 引物包括突變部位 |
| 基因已知但異常不明 | 基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性（RFLP、AMP－FLP，SSCP）連鎖分析 | 基因內(nèi)或旁側(cè)序列探針或引物 |
| 基因未知 | 與疾病連鎖的多態(tài)性，如SSCP、AMP－FLP連鎖分析，RFLP位點單體型連鎖分析 | 與疾病連鎖的多態(tài)位點探針或引物 |
許多遺傳病的基因尚未分離克隆，或基因異常尚不清楚，因此還不能根據(jù)突變的性質(zhì)進行診斷。但如果通過家系分析能證明某一DNA標(biāo)記（無論是等位基因還是多態(tài)性位點或片段）與致病基因連鎖，則凡帶有該標(biāo)記的成員都可能帶有致病基因，從而可作出間接的連鎖分析診斷。
應(yīng)用連鎖分析診斷時應(yīng)注意如下幾個問題：①基因與DNA標(biāo)記之間可能發(fā)生重組。因此連鎖分析的準(zhǔn)確性取決于DNA與致病基因連鎖的緊密程度，連鎖愈緊密，可靠性愈高，故應(yīng)采用盡量靠近致病基因，即連鎖緊密的標(biāo)記，或采用多個遺傳標(biāo)記以盡可能排除重組。由于可能存在重組，連鎖分析不能完全確定致病基因是否存在，而是指出存在可能性或概率的大小。如果標(biāo)記距基因有5cM，即重組率為5％，則作出診斷時尚有5％誤差的可能，即只有95％的把握作出肯定或否定的結(jié)論。②選用的遺傳標(biāo)記在人群中的雜合度。如果標(biāo)記的雜合度在人群中很低，即多數(shù)個體為純合子，則這種標(biāo)記用處不大。因為如家系中關(guān)鍵成員不能提供致病基因在哪一條染色體上的信息，常使連鎖分析無法進行，因此需選用人群中雜合度高的標(biāo)記。③在連鎖分析時，有時只分析一個態(tài)位點還不能把某一家系中帶有致病基因的染色體與正常染色體區(qū)分開來。這通常是由于關(guān)鍵成員如待診者的父母是純合子，不能提供必要的信息，這時可同時分析更多的多態(tài)位點，即作單倍型（haplotype）分析。單倍型是指一條染色體上兩個或兩個以上多態(tài)位點的狀態(tài)的組合。兩條染色體多個位點上都純合的概率畢竟是很小的，因此單倍型有助于區(qū)分兩條常染色體，并追蹤致病基因的分離情況。
 直接診斷和間接診斷 | 遺傳病的基因診斷舉例  |
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