組織學(xué)/細(xì)胞和細(xì)胞化學(xué)定量術(shù)

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組織和細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及其化學(xué)成分的定量研究,是以量的測定及其數(shù)據(jù)變化闡述組織和細(xì)胞的生長、分化、代謝和功能的演變以及對環(huán)境因素和致病因素的反應(yīng)。生命科學(xué)的研究不斷深入,定量技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛并有所進(jìn)展。

1、顯微鏡分光亮度定量術(shù)此方法是應(yīng)用顯微分光亮度計(jì)(microspectrophotometer)測定組織化學(xué)免疫組織化學(xué)染色標(biāo)本的反應(yīng)強(qiáng)弱,進(jìn)行化成分的定量分析的?;驹硎羌?xì)胞內(nèi)某種物質(zhì)的含量不同,其染色反應(yīng)的深淺不一,對一定波長的光吸收也就不同,即某物質(zhì)的消亮度與一定厚度和面積內(nèi)的該物質(zhì)濃度成正比。通過光電組合自動控制系統(tǒng)將消光度轉(zhuǎn)換為電信號,即可得出光密度值(O、D值),進(jìn)行定量分析比較。前述熒光素染色、酶和核酸組織化學(xué)染色、多肽蛋白質(zhì)免疫組化染色、放射自顯影原位雜交等標(biāo)本,均可應(yīng)用顯微分光光度計(jì)做定量分析。

2、形態(tài)計(jì)量術(shù) 形態(tài)計(jì)量術(shù)(morphometry)是運(yùn)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對組織和細(xì)胞進(jìn)行二維和三維的形態(tài)測量研究,如細(xì)胞及其微細(xì)結(jié)構(gòu)成分的數(shù)量、體積、表面積、周長等的相對和絕對值的測量,其中三維立體結(jié)構(gòu)的研究又稱體視學(xué)(stereology)。機(jī)體組織的光鏡結(jié)構(gòu)計(jì)量已有不少有意義的資料,如人和動物的肺泡數(shù)量和表面積,腎小體的數(shù)量和體積比,肝細(xì)胞的體積和數(shù)量,胰島的數(shù)量及各類細(xì)胞的數(shù)量比,腺垂體各種內(nèi)分泌細(xì)胞的數(shù)量比等。通過組織切片或照片(光鏡和電鏡)平面圖像的測量,推算其立體結(jié)構(gòu)數(shù)值,傳統(tǒng)方法是將測試系統(tǒng)(點(diǎn)、線、方格等)投影或覆蓋在切片上或照片上,把若干樣品的平面測量數(shù)據(jù)按數(shù)學(xué)公式推算出其立體數(shù)值。目前已廣泛應(yīng)用圖像分析儀(image analyzer)進(jìn)行形態(tài)計(jì)量研究,該儀器也是光學(xué)、電子學(xué)和計(jì)算機(jī)高技術(shù)產(chǎn)品,它是將切片或照片圖像通過攝像機(jī)顯示于監(jiān)示器屏幕上,并根據(jù)不同結(jié)構(gòu)的顏色深淺(灰度)及各像點(diǎn)的大小位置,快速準(zhǔn)確地得出所需的各種形態(tài)數(shù)據(jù)。組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色標(biāo)本,也可應(yīng)用圖像分析儀測定其光密度值,進(jìn)行定量分析。

3、流式細(xì)胞術(shù) 流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)是近年建立的細(xì)胞分類和定量研究技術(shù),它是應(yīng)用流式細(xì)胞儀(或稱熒光激活細(xì)胞分類器,fluroescent activated cell sorter)對單個(gè)細(xì)胞生物化學(xué)和生物物理特性進(jìn)行快速定量測定的。工作原理是先分離被檢細(xì)胞制成懸液,并作熒光染色或標(biāo)記,使單細(xì)胞液流快速通過該儀器的激光器照射分析區(qū),被檢細(xì)胞產(chǎn)生的不同熒光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娒}沖,分別輸入計(jì)算機(jī)內(nèi)貯存,并顯示于示波器屏幕上,即可獲得該細(xì)胞群體中不同類型細(xì)胞的有關(guān)數(shù)據(jù),如不同細(xì)胞的數(shù)量、熒光強(qiáng)度以及細(xì)胞體積、表面積和內(nèi)部結(jié)構(gòu)等參數(shù);還可使細(xì)胞附有不同電荷,分類收集各種細(xì)胞,該技術(shù)的特點(diǎn)是速度快,精確性高,靈敏度大,已成為一種重要手段廣泛用于細(xì)胞動力學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)等的研究。如細(xì)胞DNA,RNA或某種蛋白質(zhì)的含量分析,單個(gè)染色體DNA含量及分選,淋巴細(xì)胞抗原受體的分析及細(xì)胞亞群分選,雜交細(xì)胞等的分選等,也用于腫瘤臨床診斷及療效和預(yù)后的分析等。

32 原位雜交術(shù) | 電子顯微鏡術(shù) 32
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