沉降系數(shù)
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沉降系數(shù)（sedimentation coefficient）
用離心法時(shí)，大分子沉降速度的量度，等于每單位離心場(chǎng)的速度?；騭=v/ω2r。s是沉降系數(shù)，ω是離心轉(zhuǎn)子的角速度（弧度/秒），r是到旋轉(zhuǎn)中心的距離，v是沉降速度。沉降系數(shù)以每單位重力的沉降速度表示，（the velocity per unit force）并且通常為1～200×10-13秒范圍，10-13這個(gè)因子叫做沉降單位S，即1S=10-13秒沉降系數(shù)越大在離心時(shí)候越先沉降。如血紅蛋白的沉降系數(shù)約為4×10-13秒或4S。大多數(shù)蛋白質(zhì)和核酸的沉降系數(shù)在4S和40S之間，核糖體及其亞基在30S和80S之間，多核糖體在100S以上?！ ?/p>
目錄 |
定義
沉降系數(shù)（sedimentation coefficient，s）
根據(jù)1924年Svedberg（離心法創(chuàng)始人--瑞典蛋白質(zhì)化學(xué)家）對(duì)沉降系數(shù)下的定義：顆粒在單位離心力場(chǎng)中粒子移動(dòng)的速度。
To call the parameter which characterizes the movement of the particle at the centrifugal force place。
沉降系數(shù)是以時(shí)間表示的。
蛋白質(zhì)，核酸等生物大分子的S實(shí)際上時(shí)常在10的-13次秒左右，故把沉降系數(shù)10的-13次秒稱為一個(gè)Svedberg單位，簡(jiǎn)寫S，量綱為秒。
[ Adopted unit ] second
[ Another unit ] 1 svedberg = 1E(-13) sec
[ SI unit ] second
因隨溶劑的種類、溫度的變化而變化，所以通常是換算成20℃純水中的數(shù)值，進(jìn)一步算出分子間無(wú)作用力和濃度為零時(shí)的外插值。沉降系數(shù)是以分子量、分子形狀和水等情況來(lái)決定，其作為生物體大分子的一個(gè)特征是很重要的?！ ?/p>
測(cè)定
沉降系數(shù)通過(guò)分析離心機(jī)測(cè)定。
通常只需要幾十毫克甚至幾十微克樣品，配制成1~2毫升溶液，裝入分析池，以幾小時(shí)的分析離心，就可以獲得一系列的樣品離心沉降圖。根據(jù)沉降圖可以作樣品所含組分的定性分析，亦可以測(cè)定各組分的沉降系數(shù)和估計(jì)分子大小，作樣品純度檢定和不均一性測(cè)定，以組分的相對(duì)含量測(cè)定。
測(cè)定原理
沉降系數(shù)的測(cè)定原理就是在恒定的離心力場(chǎng)下測(cè)定樣品顆粒的沉降速度。
因?yàn)闃悠奉w粒很小，不能直接看到它們的沉降運(yùn)動(dòng)，所以把離心時(shí)樣品顆粒的界面移動(dòng)速度看作是樣品顆粒的平均沉降速度。通常使用Schlieren和吸收光學(xué)系統(tǒng)來(lái)記錄界面沉降圖。在沉降圖中樣品界面一般表現(xiàn)為一個(gè)對(duì)稱的峰，峰的最高點(diǎn)代表界面位置。
通常沉降系數(shù)測(cè)量精度為±2%,但是如果面界圖型表現(xiàn)為不對(duì)稱峰型，或希望沉降系數(shù)測(cè)量精度達(dá)到±1%或更小的情況時(shí)，按峰的最高點(diǎn)作為界面位置就不夠了這時(shí)應(yīng)該使用二階距法計(jì)算界面位置?！ ?/p>
基本原理
物體圍繞中心軸旋轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)受到離心力F的作用。當(dāng)物體的質(zhì)量為 M、體積為V、密度為D、旋轉(zhuǎn)半徑為r、角速度為ω（弧度數(shù)/秒）時(shí)，可得：
F=Mω2r 或者 F=V.D.ω2r （1）
上述表明：被離心物質(zhì)所受到的離心力與該物質(zhì)的質(zhì)量、體積、密度、離心角速度以及旋轉(zhuǎn)半徑呈正比關(guān)系。離心力越大，被離心物質(zhì)沉降得越快。
在離心過(guò)程中，被離心物質(zhì)還要克服浮力和摩擦力的阻礙作用。浮力F｝和摩擦力F｝｝分別由下式表示：
F’=V.D’.ω2r （2）
F’’=f dr/dt （3）
其中D｝為溶液密度，f為摩擦系數(shù)，dr/dt為沉降速度（單位時(shí)間內(nèi)旋轉(zhuǎn)半徑的改變）。
基本原理
在一定條件下，可有 ：
F=F’+F’’
V.D. ω2r =V.D’ω2r + f. dr/dt
dr/dt =Vω2r (D-D’)/f (4)
式(4)表明，沉降速度與被離心物質(zhì)的體積、密度差呈正比，與f成反比。若以S表示單位力場(chǎng)（ω2r=1）下的沉降速度，則
S=V (D-D’)/f
S即為沉降系數(shù)。
沉降系數(shù)對(duì)于生物大分子來(lái)說(shuō)，多數(shù)在(1~500)×10-13秒間。為應(yīng)用方便起見，人們規(guī)定1×10-13秒為一個(gè)單位（或稱1S）。一般單純的蛋白質(zhì)在1~20S之間，較大核酸分 子在4~100S之間，更大的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)在30～500S之間。
以蛋白質(zhì)為例溶液中的蛋白質(zhì)在受到強(qiáng)大的離心作用時(shí)，如果蛋白質(zhì)溶液的密度大于溶劑的密度，蛋白質(zhì)分子就會(huì)下沉，在離心場(chǎng)中，蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時(shí)，每單位離心場(chǎng)強(qiáng)度定值，這個(gè)定值即為沉降系數(shù)（sedimentation coefficient）。沉降速度用每單位時(shí)間內(nèi)顆粒下沉的距離來(lái)表示?！ ?/p>
測(cè)定方法
⑴樣品：蛋白質(zhì)
⑵樣品溶液與離心：將樣品溶于緩沖液中，用一定規(guī)格的雙槽分析池，一邊加入溶液一邊加入溶劑。分析池與平衡池平衡重量，使平衡池比分析池輕0.5g以內(nèi)，然后分別裝入分析轉(zhuǎn)頭。抽真空。開Schlieren光光源，選擇工作速度，室溫離心。轉(zhuǎn)動(dòng)腔達(dá)到真空后離以機(jī)開始運(yùn)轉(zhuǎn)加速，此時(shí)在觀察窗口可以看到離心圖型。達(dá)到工作速度后恒速離心。
以蛋白質(zhì)為例待看到樣品峰的尖端后即可以間隔照相。照完相即可關(guān)機(jī)，取出樣品液，清理轉(zhuǎn)頭和分析池。照相用強(qiáng)反差顯影沖洗后即得Schlieren光路沉降圖形照片。
⑶沉降圖像測(cè)量：Schlieren沉降圖可以用比長(zhǎng)儀，讀數(shù)顯微鏡，或投影儀測(cè)量。測(cè)量時(shí)把沉降圖像的底片放于測(cè)量?jī)x器上，使液面的垂直線與測(cè)量?jī)x中的垂直線重合，然后用十字標(biāo)線依次測(cè)量?jī)?nèi)參孔，液面，界面峰尖，和外參考孔的位置，每個(gè)圖像至少讀測(cè)三次，取平均值。依次把每個(gè)圖像依同樣方法測(cè)量，把數(shù)據(jù)列成表。
(4)沉降系數(shù)S的計(jì)算：代入公式計(jì)算。
圖像分析
當(dāng)離心剛開始時(shí)如果見到有快速沉降的峰，幾分鐘內(nèi)就到達(dá)分析池底部，一般多是由于樣品發(fā)生部分聚合形成快速沉降的高聚物。離心達(dá)速后樣品的的記心圖像顯示一個(gè)對(duì)稱的峰形，一般可以認(rèn)為樣品是離心均一的。但是對(duì)樣品的真正均一性還應(yīng)用其他方法進(jìn)一步檢測(cè)，如電泳，層析等。某些混合樣品偶然亦會(huì)給出一個(gè)對(duì)稱峰的。峰形通常會(huì)隨時(shí)間而擴(kuò)展，這是由于樣品擴(kuò)散的結(jié)果。但如果峰形擴(kuò)展很快，則該樣品可能是多分散性的。如果離心圖像中表現(xiàn)幾個(gè)峰，說(shuō)明樣品中有幾個(gè)組分，每一個(gè)峰代表相應(yīng)組分的沉降界面，因此可以測(cè)定每一個(gè)組分的沉降系數(shù)值。根據(jù)峰的面積可以測(cè)量組分的濃度值。
有時(shí)離心的圖像表現(xiàn)出一個(gè)不對(duì)稱的峰，這可能是由于下列幾種情況所致。①幾個(gè)沉降系數(shù)接近的組分峰形重疊，②樣品是多分散性的，其分子量分布不均勻，③某些相互作用強(qiáng)的高分子，其沉降速度對(duì)濃度依賴很大。若測(cè)定于高濃度，在界面區(qū)由于濃度變化造成沉降速度不一致而致峰形呈不對(duì)稱分布
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