細胞系

初代培養(yǎng)物開始第一次[[傳代培養(yǎng)]]后的[[細胞]]，即稱之為[[細胞系]]。如細胞系的生存期有限，則稱之為有限細胞系（FiniteCellLine）；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細胞系，稱連續(xù)細胞系或無限細胞系{{百科小圖片|bkb93.jpg|建立細胞系流程圖}}（InfiniteCellLine）。無限細胞系大多已發(fā)生異倍化，具[[異倍體]][[核型]]，有的可能已成為惡性細胞，因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留[[接觸抑制]]和無異體[[接種]]致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說明已惡性化。由某一細胞系分離出來的、在性狀上與原細胞系不同的細胞系，稱該細胞系的亞系（Subline）。　　
==細胞系-概念分歧==
現(xiàn)行的人教社大綱版選修教材中是這樣介紹[[細胞株]]和細胞系的：

[[原代培養(yǎng)]]的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長就會出現(xiàn)停滯，大部分[[細胞衰老]]死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代，這種[[傳代]]細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”，不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，并且?guī)в衃[癌變]]的特點，有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。{{百科小圖片|bkb94.jpg|GENE 細胞系}}在一些別的資料中，細胞株和細胞系的概念與我們教材上的說法正好相反。課標教材沒有再介紹這一對概念。這又是為什么呢？人教社編輯包春瑩老師（bcying）對這一疑點的解釋：細胞系和細胞株，兩者曾一度混用，導致有些文獻中概念不清。下面所指的概念是現(xiàn)在國內(nèi)外比較通用的，也是絕大多數(shù)研究者接受的觀點。

原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功即稱為細胞系（CellLine），因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續(xù)傳代的細胞叫做連續(xù)細胞系或無限細胞系，不能[[連續(xù)培養(yǎng)]]的稱為有限細胞系。大多數(shù)[[二倍體細胞]]為有限細胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的[[培養(yǎng)物]]稱為細胞株（CellStrain），也就是說，細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞[[增殖]]形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在?！　?==細胞系-[[腫瘤細胞]]系==
這是現(xiàn)有細胞系中最多的一類，中國已建細胞系主要為這類細胞。腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類[[上皮]]型細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。 

對已建成的各種細胞系或細胞株習慣上都給以名稱；細胞的命名無嚴格統(tǒng)一規(guī)定，大多采用有一定意義縮寫字或代號表示。但不論什么形式，均不宜太長，以便記憶和了解，今別舉以下幾種代表性的細胞名稱供參考：{{百科小圖片|bkb95.jpg|X[[射線]]誘導4種細胞系的DNA損傷與劑量的關系}}HeLa：為[[供體]]患者的姓名（來源于[[宮頸癌]]）

CHO：中國[[地鼠]][[卵巢]]細胞（ChineseHamsterOvary）

宮-743：宮頸癌[[上皮細胞]]，1974年3月建立

NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究所（NationalInstituteofHealth）建立；每3天傳代，每次接種3×105細胞／毫升?！　?==細胞系-建立細胞系的要求==
什么樣的體外培養(yǎng)群可被認可為己鑒定的細胞，視具體情況而定，無統(tǒng)一規(guī)定。對于用作原代培養(yǎng)的細胞只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可，如用做長期培養(yǎng)，特別是反復傳代的細胞，常需做如下說明：

1、組織來源：細胞供體所屬[[物種]]，來自人體或者動物；個體性別、年齡；取材的器官或組織。如系[[腫瘤]]組織，應說明臨床和[[病理]]診斷，以及病歷號等。

2、[[細胞生物學]]檢測：

了解細胞一般和特殊的[[生物學性狀]]，如細胞一般形態(tài)，特異結(jié)構，細胞生長曲線和分裂指數(shù)，[[倍增時間]]，[[接種率]]等。如為腫瘤細胞，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做[[軟瓊脂培養(yǎng)]]，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗。

3、培養(yǎng)條件和方法；應說明細[[胞系]]（或株）適應的生存環(huán)境，即指明使用的[[培養(yǎng)基]]、[[血清]]種類、用量以及適宜PH值。　　
==細胞系-建株要點和過程==
（一）腫瘤細胞培養(yǎng)技術要點

1、取材：材料主要來源于[[外科手術]]或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移[[淋巴結(jié)]]或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。 

2、[[成纖維細胞]]排除：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應仔細排除。排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、[[消化]]排除法、[[膠原酶]]消化法等。{{百科小圖片|bkb96.jpg|[[紅細胞系]]}}3、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率

根據(jù)實驗經(jīng)驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后，要經(jīng)過對新環(huán)境的適應才能生長，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜[[底物]]，鼠尾[[膠原]]底層及飼細胞底層等。用[[細胞生長因子]]，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞[[生長因子]]，如[[胰島素]]、[[氫化可的松]]，[[雌激素]]等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

（二）人類[[淋巴母細胞]]建株方法

l、4ml[[肝素]]抗凝血于[[離心管]]中，加入2mlRPMI1640。

2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml[[淋巴細胞分離液]]的液面上靜置30min。

3、1500rpm，15min，吸取[[白細胞]]層（第二層）于另一離心管中。

4、加RPMI16405ml洗滌白細胞兩次。

5、將白細胞接種至1mlRPMI1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EBV（EB[[病毒]]）液，混勻。

6、[[水浴搖床]]，40次/分，37℃，3hr。

7、1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含[[谷氨酰胺]]1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。

8、5天后觀察細胞轉(zhuǎn)化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。

9、待轉(zhuǎn)化細胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細胞團塊后，可轉(zhuǎn)入25ml[[細胞培養(yǎng)]]瓶中，加1—2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10-15天，一般每隔3-4天觀察一次，決定是否換液，傳代。

10、細胞生長達一定數(shù)量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔?！　?==細胞系-鑒定、管理和使用==
當一個細胞系建成后，中國常通過組織專家開鑒定會的形式予以鑒定，從學術角度考慮，此舉實非必要。按國際慣例，只要研究認真負責地把有關資料在雜志或刊物上報道，詳細介紹上述各項目即可。 

以前因未建立統(tǒng)一的[[細胞庫]]時，對已建立的細胞系（株）多由作者單位自行保管，有浪費人力、交流使用不便、細胞易污染和丟失等弊病。我國已初建成小規(guī)模貯存細胞機構，待獲進一步發(fā)展，這對我國細胞培養(yǎng)必將有更大促進作用。{{百科小圖片|bkb97.jpg|細胞系中的應用}}國際上美、英和日本等國已建有細胞庫；美國已有美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）和人遺傳[[突變]]細胞庫（HGMR）、細胞衰老細胞庫（CAR）等，其中ATCC不僅是美國也世界最大的細胞庫。ATCC下屬有一組協(xié)作實驗室和一個由眾多專家組成的咨詢委員會。ATCC也是美國國立[[癌癥]]研究所（NCI）和美國衛(wèi)生研究所中（NIH）的資源庫，尤與NCI有密切的關系。ATCC也是[[世界衛(wèi)生組織]]WHO的國際培養(yǎng)細胞文獻中心。ATCC現(xiàn)液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細胞系（1992），其中包括來自正常人和各種[[疾病]]患者的[[皮膚]]成纖維細胞系；和來自不同物種的近75個[[雜交瘤]]細胞株。ATCC接納來自世界各國已經(jīng)鑒定的細胞予以貯存，同時也向世界各國的研究者或?qū)嶒炇颐赓M提供研究用細胞（做盈利性研究時收費。）ATCC接納入庫細胞時，必須符合其入庫標準，ATCC入庫細胞要求檢測項目如下：

培養(yǎng)簡歷：組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正?；虍惓＝】禒顟B(tài)、細胞已[[傳代數(shù)]]等

凍存液：培養(yǎng)基和防凍液名稱

細胞活力：[[融解]]前后細胞接種存活率和生長特性

[[培養(yǎng)液]]：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含[[抗生素]]）、血清來源和含量

細胞形態(tài)：類型，如為上皮或成纖維細胞等，融解后細胞生長特性

核型：[[二倍體]]或[[多倍體]]，[[標記染色體]]的有無

無污染檢測：包括[[細菌]]、[[真菌]]、[[支原體]]、[[原蟲]]和病毒等

物種檢測：檢測[[同工酶]]，主要為G6PD和LDH，以證明細胞有否交叉污染以及[[反轉(zhuǎn)錄酶]]檢測

[[免疫]]檢測：一兩種[[血清學]]檢測

細胞建立者：建立者姓名；檢測者姓名

[[分類:生物學]]