拓撲異構(gòu)酶

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{{百科小圖片|bk8x1.jpg|}}DNA[[拓撲異構(gòu)酶]]是存在于[[細胞核]]內(nèi)的一類酶，他們能夠[[催化]]DNA鏈的斷裂和結(jié)合，從而控制DNA的拓撲狀態(tài)。近來的研究表明，在RNA[[轉(zhuǎn)錄]]過程中，拓撲異構(gòu)酶參與了[[超螺旋結(jié)構(gòu)]]模板的調(diào)節(jié)。主要存在兩種哺乳動物拓撲異構(gòu)酶。DNA拓撲異構(gòu)酶I通過形成短暫的[[單鏈]]裂解-結(jié)合循環(huán)，催化DNA復(fù)制的拓撲異構(gòu)狀態(tài)的變化；相反，拓撲異構(gòu)酶II通過引起瞬間[[雙鏈酶]]橋的斷裂，然后打通和再封閉，以改變DNA的拓撲狀態(tài)。哺乳動物拓撲異構(gòu)酶II又可以分為αII型和βII型。拓撲異構(gòu)酶[[毒素類]]藥物的抗腫瘤活性與其對酶-DNA可分裂[[復(fù)合物]]的穩(wěn)定性相關(guān)。這類藥物通過穩(wěn)定酶-DNA可分裂復(fù)合物，有效地將酶轉(zhuǎn)換成纖維[[毒素]]。 臨床使用的幾種[[抗腫瘤藥物]]可以作為哺乳動物[[異構(gòu)酶]]II型毒素。這些藥物包括[[阿霉素]]（adriamycin）、放線霉素D（actinomycinD）、道諾梅素（daunomycin）、VP-16、VM-26（[[替尼泊苷]]teniposide或者表鬼臼毒素（epipodophyllotoxin）。相對來說，無論是臨床，還是處在試驗階段的，作為哺乳動物異構(gòu)酶II型毒素的藥物較多，而目前確定可以作為拓撲異構(gòu)酶I毒素的藥物只有極少數(shù)。[[喜樹堿]]（Camptothecin）及其類似體是研究得最為廣泛的拓撲異構(gòu)酶I型毒素。最近已被確定為拓撲異構(gòu)酶I型的毒素有： 雙-和四苯咪唑（Chen等，CancerRes.1993,53,1332-1335;Sun等,J.Med.Chem.1995,38,3638-3644；Kim等,J.Med.Chem.1996,39,992-998），某些[[白屈菜]][[生物堿]]（benzo[c]phenanthridine）和原[[小檗堿]]類生物堿（protoberberine）與合成的類似體（Makhey等，Med.Chem.Res.1995,5,1-12； Janin等，J.Med.Chem.1975，18，708-713；Makhey等，Bioorg.&Med.Chem.1996,4,781-791），以及bulgerain（Fujii等,J.Biol.Chem.1993，268，13160-13165），saintopin（Yamashita等，Biochemistry1991，30，5838-5845）和indolocarbazoles(Yamashita等，Biochemistry1992，31，12069-12075)。 其他被確定的拓撲異構(gòu)酶毒素則包括某些白屈菜生物堿（benzophenanthridine）和cinnoline[[化合物]]（見LaVoie等，美國專利6140328，以及WO01/32631）。盡管這些化合物大有用途，但是由于其較低的[[溶解性]]使得他們的應(yīng)用受到限制。 2006年1月下旬，美國專利局連續(xù)授予了美國新澤西大學(xué)關(guān)于以拓撲異構(gòu)酶（topoisomerase）為作用靶位的氨基和硝基替代類藥物的合成及應(yīng)用的四個專利。 DNA拓撲異構(gòu)酶可以分兩類：一類叫拓撲異構(gòu)酶I，一類叫拓撲異構(gòu)酶II。拓撲異構(gòu)酶I催化DNA鏈的斷裂和重新連接，每次只作用于一條鏈，即催化瞬時的單鏈的斷裂和連接，它們不需要能量[[輔因子]]如ATP或NAD。E.coli DNA拓撲異構(gòu)酶I又稱ω[[蛋白]]，大白鼠肝DNA拓撲異構(gòu)酶I又稱切刻-封閉酶(nicking-closing enzyme )。拓撲異構(gòu)酶II能同時斷裂并連接雙股DNA鏈．它們通常需要能量輔因子ATP。在拓撲異構(gòu)酶II中又可以分為兩個[[亞類]]：一個亞類是DNA[[旋轉(zhuǎn)酶]](DNA gyrase )，其主要功能為引入負[[超螺旋]]，在DNA復(fù)制中起十分重要的作用。迄今為止，只有在[[原核生物]]中才發(fā)現(xiàn)DNA旋轉(zhuǎn)酶．另一個亞類是轉(zhuǎn)變超螺旋DNA(包括正超螺旋和負超螺旋)成為沒有超螺旋的松弛形式(relaxed form )。這一反應(yīng)雖然是熱力學(xué)上有利的方向，但不知道為什么它們?nèi)匀幌馜NA旋轉(zhuǎn)酶一樣需要ATP，這可能與恢復(fù)酶的[[構(gòu)象]]有關(guān)。這一類酶在原核生物和真核生物中都有發(fā)現(xiàn)。 拓撲異構(gòu)酶I　拓撲異構(gòu)酶II DNA旋轉(zhuǎn)酶 DNA拓撲異構(gòu)酶能催化的反應(yīng)很多，這里只能作簡單敘述。DNA拓撲異構(gòu)酶I對單鏈DNA的親和力要比雙鏈高得多，這正是它識別負超螺旋DNA的[[分子]]基礎(chǔ)，因為負超螺旋DNA常常會有一定程度的單鏈區(qū)。負超螺旋越高，DNA拓撲異構(gòu)酶I作用越快?，F(xiàn)已知道，生物體內(nèi)負超螺旋穩(wěn)定在5%左右，低了不行，高了也不行。生物體通過拓撲異構(gòu)酶1和II的相反作用而使負超螺旋達到一個穩(wěn)定狀態(tài)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，編碼E．coli拓撲異構(gòu)酶I的[[基因]]topA發(fā)生[[突變]]，則會引起旋轉(zhuǎn)酶基因的[[代償]]性突變；否則，負超螺旋增高，[[細胞]]生活能力降低。拓撲異構(gòu)酶I作用的[[堿基]]序列特異性不高，但切點一定在C的下游方向4個堿基(包括C本身)的位置。在將DNA單鏈切斷后，拓撲異構(gòu)酶I連接于切口的5端，并貯藏了水解[[磷酸]]二脂鍵的能量用以連接切口，因而拓撲異構(gòu)酶I的作用不需能量供應(yīng)。此外．拓撲異構(gòu)酶I還能促進兩個單鏈環(huán)的[[復(fù)性]]，其作用是解除復(fù)性過程所產(chǎn)生的鏈環(huán)數(shù)的負值壓力，以使復(fù)性過程進行到底。如果在間一個單鏈環(huán)上一個部位切斷，而使另-部位繞過切口．則可產(chǎn)生三葉結(jié)構(gòu)分子 (trefoil knot)。如果有兩個雙鏈環(huán)，其中一個有一個切刻，拓撲異構(gòu)酶1則可以將切刻對面的一條鏈切斷，伎完整的雙鏈環(huán)套進去，再連接起來而成為環(huán)連體分子(catenane)，以上這三種反應(yīng)示于右圖。拓撲異構(gòu)酶I還能催化其他反應(yīng)，這將在復(fù)制和[[重組]]的機制中再講述。 [[大腸桿菌]]的拓撲異構(gòu)酶II(gyrase)除了引入負超螺旋以外．還具有形成或拆開雙鏈DNA環(huán)連體和成結(jié)分子的能力。II類拓撲異構(gòu)酶沒有堿基序列特異性，它們可以和任何相交的兩對雙鏈DNA結(jié)合。DNA旋轉(zhuǎn)酶有兩個α[[亞基]]和兩個β亞基。α亞基約105KDa，為gyrA基因所編碼，具有磷酸二脂[[酶活性]]，可為萘啶[[酮酸]](nalidixic acid )所抑制。A亞基約95KD，為graB基因所編碼，具有ATP酶活性，可為[[新生霉素]](novobiocin )所抑制。這兩種藥物均可抑制[[野生型]]大腸桿菌的DNA復(fù)制。可見DNA旋轉(zhuǎn)酶為E．coli的復(fù)制所不可缺少的。在切斷一條DNA雙鏈后，兩個a亞基各結(jié)合于切口的一個'端，并貯藏了水解[[磷酸二酯鍵]]而獲得的能量，由于該酶的整體性，因而DNA鏈的四個斷頭并無任意旋轉(zhuǎn)的可能性。由于酶的[[別構(gòu)效應(yīng)]]，使完整的雙鏈穿過切口，然后再重新形成磷酸二酯鍵。β亞基的功能在于水解ATP以使酶分子恢復(fù)原來的構(gòu)象，以便進行下一輪反應(yīng)。這一點可以用ATP的同系物β,γ-亞氨基ATP代替ATP而得到證實。因為這一同系物不能被DNA旋轉(zhuǎn)酶所水解，但它確能促進第一輪拓撲異構(gòu)反應(yīng)，使負超螺旋增加，而妨礙以后進一步的拓撲異構(gòu)反應(yīng)。 DNA拓撲異構(gòu)酶催化的反應(yīng)很多，其反應(yīng)本質(zhì)是先切斷DNA的磷酸二脂鍵，改變DNA的鏈環(huán)數(shù)之后再連接之，兼具DNA[[內(nèi)切酶]]和DNA[[連接酶]]的功能．然而它們并不能連接事先已經(jīng)存在的斷裂DNA，也就是說，其斷裂反應(yīng)與連接反應(yīng)是相互耦聯(lián)的。拓撲異構(gòu)酶（包括Ⅰ型和II型）都可以用符號轉(zhuǎn)化模型進行解釋（下圖左中） 除了DNA拓撲異構(gòu)酶可以產(chǎn)生異構(gòu)變化以外，很多能夠嵌入相鄰堿基之間影響堿基堆集作用的[[試劑]]，特別是片狀的染料分子．也能改變DNA的拓撲狀態(tài)，最明顯的例子就是溴化乙錠(ethidium bromide)。例如以SV40的CCC分子與溴化乙錠的結(jié)合試驗為例，當沒有染料時，此DNA為負超螺旋，具有較高的沉降常數(shù)(21S)；當加入染料分子與[[核苷酸]]之比為0.05時，沉降數(shù)降至l6S，此時DNA為沒有超螺旋的松弛形式；當染料分子和核苷酸的比值增加到0.09時，沉降常數(shù)又上升到大約21S，此時DNA分子為正超螺旋。這種關(guān)系如上圖右所示，不過要注意的是，溴化乙錠并沒有改變Lk值，只不過是由溴化乙錠分子的嵌入，增加了局部DNA[[二級結(jié)構(gòu)]]的緊纏狀態(tài)。因而，隨著[[嵌入染料]]分子數(shù)的增多，起初表現(xiàn)為負超螺旋的減少與消失，隨后便是正超螺旋的增加。這與單鏈DNA[[結(jié)合蛋白]]促進負超螺旋轉(zhuǎn)變?yōu)榕轄罱Y(jié)構(gòu)的情況是類似的。 拓撲異構(gòu)酶（topoisomerase）:通過切斷DNA的一條或兩條鏈中的磷酸二酯鍵，然后重新纏繞和封口來改變DNA連環(huán)數(shù)的酶。拓撲異構(gòu)酶Ⅰ、通過切斷DNA中的一條鏈減少負超螺旋，增加一個連環(huán)數(shù)。某些拓撲異構(gòu)酶Ⅱ也稱為DNA[[促旋酶]]。 DNA拓撲異構(gòu)酶 DNA topoisomerase 為催化DNA拓撲學(xué)[[異構(gòu)體]]相互轉(zhuǎn)變的酶之總稱。催化DNA鏈斷開和結(jié)合的[[偶聯(lián)]]反應(yīng)，為了分析體外反應(yīng)機制，用環(huán)狀DNA為[[底物]]。在[[閉環(huán)]]狀雙鏈DNA的拓撲學(xué)轉(zhuǎn)變中，要暫時的將DNA的一個鏈或兩個鏈切斷，根據(jù)異構(gòu)體化的方式而分為二個型。切斷一個鏈而改變拓撲結(jié)構(gòu)的稱為Ⅰ型拓撲異構(gòu)酶（top- oisomeraseⅠ），通過切斷二個鏈來進行的稱為Ⅱ型拓撲異構(gòu)酶（topoisomeraseⅡ）。屬于Ⅰ型的拓撲異構(gòu)酶，有大[[腸桿菌]]的ω蛋白（ω-protein，由分子量11萬的單個[[多肽]]鏈所成）及各種[[真核細胞]]中存在的切斷-結(jié)合酶（nicking-closing enzyme，分子量約6萬5千—7萬的及分子量約10萬的）。Ⅱ型拓撲異構(gòu)酶，有存在于[[細菌]]中的DNA促旋酶、[[噬菌體]]T4的拓撲異構(gòu)酶Ⅱ以及真核細胞中依賴ATP的拓撲異構(gòu)酶Ⅱ等。另外，噬菌體λ的irt[[基因產(chǎn)物]]和噬菌體φX174的基因A的產(chǎn)物等也具有切斷—結(jié)合酶的活性，可認為是拓撲異構(gòu)酶之一種。Ⅰ型拓撲異構(gòu)酶不需要ATP的能量而催化異構(gòu)體化，作為反應(yīng)的中間產(chǎn)物，在原核生物來說是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成[[共價鍵]]，而[[真核生物]]是3′-OH末端5′-磷酸末端與酶形成共價鍵。此酯鍵中所貯存的能量，可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。Ⅰ型拓撲異構(gòu)化酶催化的反應(yīng)有下列各種：使超螺旋DNA在每一切斷—結(jié)合反應(yīng)中，使L數(shù)（參見DNA拓撲學(xué)異構(gòu)體）發(fā)生一種變化，即松弛（relaxation）（圖1）。將互補的單鏈環(huán)狀DNA轉(zhuǎn)變成具有[[螺旋結(jié)構(gòu)]]的雙鏈環(huán)狀DNA（圖 2），使單鏈DNA打結(jié)（topological knot）或解結(jié)（圖3）。另外在二個環(huán)狀雙鏈DNA一個分子的一個鏈切斷時，形成鏈環(huán)狀[[二聚體]]的分子（ca-tenane）。在Ⅱ型拓撲異構(gòu)酶中，DNA促旋酶可單獨催化閉環(huán)狀DNA產(chǎn)生超螺旋，這是獨特的。其它二個型的酶，除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外，還可催化促旋酶的催化反應(yīng)。真核細胞的拓撲異構(gòu)酶Ⅰ，參與[[核小體]]的形成，細菌的ω蛋白參與轉(zhuǎn)錄和某種轉(zhuǎn)位子的插入。促旋酶和T4拓撲異構(gòu)酶Ⅱ參與DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程。 拓撲異構(gòu)酶 DNA 拓撲異構(gòu)酶 I （DNA Topoisomerase I）催化4種反應(yīng)：①超螺旋的松弛；②繩結(jié)(knot)的形成；③環(huán)狀雙鏈分子的形成；④環(huán)狀雙鏈分子的連接。本酶由于來源于小牛胸腺，與來源于原核生物的酶性質(zhì)不同，即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。而且，原核生物由來的DNA Topoisomerase I 只作用負鏈的超螺旋分子，而本酶則能使正負兩方的超螺旋分子均形成松散型。 用途：DNA的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換和解析 Ⅱ型拓撲異構(gòu)酶 Ⅱ型拓撲異構(gòu)酶巧妙地執(zhí)行了打開DNA雙螺旋的過程。它將DNA的一個雙螺旋結(jié)構(gòu)切開，并讓另一個螺旋從缺口處穿過，在此之后一個雙螺旋便被打開。這里顯示的圖片是由兩個蛋白構(gòu)建的：這個編號為1bgw的蛋白具有拓撲異構(gòu)酶的下半部分結(jié)構(gòu)，另外一個編號為1eil的蛋白來自于一個旋轉(zhuǎn)酶的[[結(jié)構(gòu)域]]，它與拓撲異構(gòu)酶的上部很相似。拓撲異構(gòu)酶具有很高的催化活性，它具有一些類似于“門”的結(jié)構(gòu)，控制著DNA進入到其上面的兩個裂口內(nèi)。 此處用紅色顯示的兩個[[酪氨酸]]與DNA鏈相結(jié)合并形成共價鍵，并且這種緊密的結(jié)合方式直到DNA重新恢復(fù)為止。 具體的講解可以到這幾個URL查看 http://jpkc.scuta.edu.cn/show_detail.asp?detail_id=1792&id=2 http://etc.lyac.edu.cn/courseware/01_02fenzishengwuxue/class/book/Book1_08.htm DNA復(fù)制 拓撲異構(gòu)酶的視頻文件URL http://www.jpkc.tzc.edu.cn/list/keshisheng/sw/kejian/ljc/donghua/12/DNA%20jiexuan.mov 拓撲異構(gòu)酶的作用是使超級螺旋松弛。所謂超級螺旋是DNA中張力積聚的形式。拓撲異構(gòu)酶抑制成分是重要抗腫瘤藥物，被認為通過穩(wěn)定拓撲異構(gòu)酶與DNA之間所形成的一種共價復(fù)合物來發(fā)揮作用，后者又為DNA復(fù)制機制設(shè)置了一障礙?？茖W(xué)家對以拓撲異構(gòu)酶為作用目標的藥物的藥效起源仍不是很了解，但現(xiàn)在對Topotecan（一種主要用來治療[[卵巢癌]]和[[小細胞]][[肺癌]]的藥物）和一種拓撲異構(gòu)酶IB-DNA復(fù)合物之間的相互作用所做的單分子研究，顯示了一過程中為詳細的內(nèi)容。本期封面圖片所示為由于該藥物的作用而造成的正向DNA超級螺旋的積累。DNA的這種超級纏繞會妨礙一種DNA[[聚合酶]]的前行，并且在阻止或破壞[[復(fù)制叉]]，從而導(dǎo)致[[細胞死亡]]過程中也可能扮演一個角色。 DNA螺旋與拓撲異構(gòu)酶相互作用的新發(fā)現(xiàn) 一個荷蘭人領(lǐng)導(dǎo)的國際性研究組在分子水平上破解了自然釋放DNA中積累起來的扭曲張力的機制。來自Delft理工大學(xué)、Ecole Normale Superieure和Sloan-Kettering研究所的研究人員將他們的發(fā)現(xiàn)公布在3月31日的《自然》雜志上，并成為這一期雜志的封面。 IB型拓撲異構(gòu)酶能夠釋放DNA鏈中積累的扭力。研究過程中，研究人員能夠在分子水平上跟蹤一個單個的拓撲異構(gòu)酶分子一段時間內(nèi)在單個DNA分子上的活動。拓撲異構(gòu)酶能夠夾著DNA、切開兩個DNA鏈中的一個并使DNA在與[[粘性末端]]重新結(jié)合在一起前變得舒展。在靈敏的檢測儀器的幫助下，研究人員能夠測量不同參數(shù)，如在酶空腔中的旋轉(zhuǎn)的DNA的摩擦力。這項研究對DNA和這種酶之間的相互作用有了新的了解。 DNA的兩個單鏈紐在一起并形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，而雙鏈的[[堿基對]]序列儲存著[[遺傳信息]]。在細胞分裂過程中，遺傳物質(zhì)被復(fù)制并且負責(zé)復(fù)制的酶必須能夠?qū)⑦@些堿基序列轉(zhuǎn)錄。但是要實現(xiàn)這個過程就必須將需要轉(zhuǎn)錄的DNA部分變直。這種纏繞和舒展共存的DNA分子中產(chǎn)生了扭力，其扭力的大小隨著細胞分裂過程的發(fā)展而增加。這種[[力能]]夠延遲細胞分裂過程并且在一些情況下甚至終止分裂，而IB型拓撲異構(gòu)酶則能減少這些扭力。 這種酶釋放DNA扭力的步驟如下：拓撲異構(gòu)酶先像夾子一樣夾住雙鏈DNA，然后瞬時穿過兩條DNA鏈中的其中一條。DNA分子中積累的這種扭力然后在完整鏈附近被消磨掉。在旋轉(zhuǎn)之后，這種酶再次緊緊抓住旋轉(zhuǎn)的DNA并將斷裂的鏈重新粘連起來。研究人員能夠測定出這種拓撲異構(gòu)酶在剪切和粘連過程之間卸掉的超螺旋的確切數(shù)目。 IB型拓撲異構(gòu)酶工作的精確機制還對[[癌癥]]研究有重要意義。能夠抑制IB拓撲異構(gòu)酶功能的藥物已在臨床上有所使用，但它們的使用可能在獲得這些發(fā)現(xiàn)后得到改善 DNA拓撲異構(gòu)酶 詞性及解釋 Part of speech and definition 【醫(yī)】DNA topoisomerase 例句 Sentences One of a group of enzymes that catalyzes the conversion of one isomer into another. 異構(gòu)酶一種能對一種異構(gòu)體轉(zhuǎn)化為另一種異構(gòu)體進行催化物的一組酶 To become changed into an isomeric form. 異構(gòu)變成了一種異構(gòu)形式 isomerization of petroleum hydrocarbons [[石油]]烴異構(gòu)化 Any of various mixtures of xylidine isomers. 一種[[二甲基苯胺]]同分異構(gòu)體的混合物 isomerism of coordination compounds 配合物的異構(gòu)現(xiàn)象 [[分類:分子生物學(xué)]][[分類:遺傳學(xué)]][[分類:基因]] {{導(dǎo)航板-自身抗原}}

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